Hasil Pencarian  ::  Simpan CSV :: Kembali

"Oct-4 dan Klf4 merupakan dua gen penyandi pluripotensi yang terdapat pada manusia. Kedua gen tersebut dapat dideteksi pada mRNA sel kanker manusia dengan menggunakan rancangan primer spesifik pada metode RT-PCR. Proses RT-PCR akan mengubah mRNA menjadi cDNA yang kemudian hasilnya dilakukan purifikasi dari gel agarosa. Hasil purifikasi gel agarosa diamplifikasi dengan PCR. Selanjutnya, dilakukan proses sekuensing untuk memeriksa keakuratan sekuen gen yang nantinya akan dikloning. Hasil sekuensing dianalisis dengan BLASTN untuk pencarian homologi pada database asam nukleat. Ligasi dilakukan menggunakan vektor pET101/D-TOPO®. Rancangan primer yang spesifik dan penambahan basa CACC ATG pada primer forward merupakan syarat untuk melakukan ligasi DNA ke vektor pET101/D-TOPO®, dimana proses ligasi ini tidak menggunakan enzim ligase. Selanjutnya, produk hasil ligasi ditransformasi ke inang Escherichia coli DH5α yang selnya sudah dibuat kompeten dengan metode heat shock. Koloni yang tumbuh di media LB agar dengan ampisilin diisolasi untuk mendapatkan plasmid yang selanjutnya dianalisis dengan menggunakan teknik PCR. Vektor plasmid yang terdapat pada E.coli DH5α kompeten mengandung sisipan gen Oct-4 dan Klf4.

---

Oct-4 and Klf4 are two genes coding of pluripotency in human. Both of the genes can be detected in human cancer cell mRNA by using specifically designed primers in RT-PCR method. RT-PCR process changed the mRNA into cDNA. The result from this process was purified from agarose gel fragment and amplified by PCR method. Then, sequencing of the purified products were done and analyzed using BLASTN feature in NCBI site to search the homology of the sequence compared to the sequences in nucleic acid database. The vector used in ligation process was pET101/D-TOPO® vector. Specifically designed primers and adding CACC ATG base in the beginning of forward primer are the requirements of using this vector. The ligation process using this TOPO® vector does not require the presence of DNA ligase. The next process is transformation by using the heat shock method. Ligation product is transformed into competent Escherichia coli DH5α host. Colonies that grows in LB agar media with ampicillin are treated by plasmid isolation protocol in order getting the plasmids for further anlysis using PCR method. The result from PCR analysis shows that the plasmids in competent E.coli DH5α contain Oct-4 and Klf4 inserts."

"ABSTRAKPenemuan akan sel pluripoten pada kulit prepusium, yang sebelumnya dibuang,menunjukan bahwa kulit prepusium dapat dijadikan sumber untuk bank sel puncayang dapat bermanfaat bagi donor dan keluarganya. Dalam transportasi jaringanke bank, kami ingin melihat metode yang lebih sederhana dan murah denganmenggunakan biang es dan es dibandingkan dengan nitrogen cair untukmemelihara sel-sel punca. Kulit-kulit prepusium diperoleh dari sirkumsisi masaldengan persetujuan dari para subjek dan dikirim dengan menggunakan biang esatau es. Di laboratorium, sampel kulit diproses dengan teknik histologi,pewarnaan Hematoxylin-Eosin (HE), dan Imunohistokimia (IHK) menggunakanantibodi Oct-4. Data hasil percobaan dianalisis dengan mikroskop, OptiLab?,Image Raster?, dan SPSS. Ekspresi positif dari Oct-4 dihitung dan dianalisisdengan SPSS. Rata-rata dari ekspresi positif Oct-4 adalah 2.30 pada sampel yangdikirim dengan menggunakan biang es, dan 2.38 pada es. Hasil dari percobaankami menunjukkan tidak ditemukannya perbedaan yang berarti antara biang esdan es (nilai P adalah 0.091). Dengan demikian, biang es dan es memiliki fungsiyang sama sebagai metode transportasi dingin untuk kulit prepusium dan dapatdigunakan sebagai jembatan menuju pembekuan dengan nitrogen cair

---

ABSTRACTThe discovery of pluripotent cells in preputial skin, a previously discarded tissue,means prepuce can become a new source of stem cell banking which can bebeneficial for the donor and his family. In transporting preputial skin to thebiobank, we wanted to see simpler and inexpensive cold transport methods usingdry ice and ice rather than liquid nitrogen to preserve the stem cells. The preputialskins were obtained from mass circumcision with informed consent andtransported into the laboratory with dry ice or ice. In the laboratory, the skinsamples underwent histotechnique process, Hematoxylin-Eosin (HE) staining, andImmunohistochemistry (IHC) with Oct-4 antibody staining. The data wasanalyzed using microscope, OptiLab?, Image Raster?, and SPSS. Oct-4 positiveexpression was counted and the data was examined with SPSS. The mean of Oct-4 expression in samples transported with dry ice was 2.30 and ice was 2.38. Ourstudy resulted in no significant difference between dry ice and ice (P value is0.901) in the Oct-4 expression. Thus, dry ice and ice have equal function as coldtransport method for preputial skin and can be used as a bridge towards liquidnitrogen freezing."

"ABSTRAKStudi tentang sel punca pluripoten di preputium adalah salah satu topik yangbelum banyak dilakukan namun sedang berkembang. Beberapa penanda sepertipenanda pluripotensi oct-4 dan penanda proliferasi ki-67 telah dilaporkankeberadaannya di preputium. Untuk menumbuhkan sel punca tersebut, teknikisolasi dan kultur yang baik perlu dilakukan. Pengertian lebih dalam mengenai selpunca di preputium dapa tmembuka kemungkinan baru dalam terapi rekonstruksikulit seperti cangkok kulit. Tujuan riset ini adalah untuk melakukan penetapanmetode awal isolasi dan kultur sel dermis dan hipodermis preputium danmengidentifikasi sel positif oct-4 dan ki-67.Dermis dan hipodermis diisolasi dan dikultur di 12-well plate dan dipindahkan ke24-well plate. Kultur diobservasi untuk identifikasi sel-sel fibroblastik. Panen seldilakukan dengan tripsinasi dan sentrifugasi. Pellet difiksasi dengan methanol dandi-mount ke preparat histologi. Preparat diproses immunositokimia denganantibodi oct-4 dan ki-67 dan diobservasi dibawah mikroskop cahaya.Pada kesimpulannya, dibutuhkan lebih banyak sel untuk analisis sel positif oct-4dan ki-67. Oleh karena itu, optimasi metode isolasi dan kultur dermis danhipodermis preputium masih diperlukan.

---

ABSTRACTThe study on pluripotent stem cell in prepuce is one of the topic on stem cell that is not yet common but rapidly developing. Several markers such as Oct 4 for pluripotency and ki 67 for proliferation have been reported in prepuce. To generate these stem cells, careful isolation and cell culture are performed. Better understanding of stem cells in prepuce can open more possibilities in skin regeneration and skin reconstruction treatment such as skin graft. This research aims to perform initial establishment method for isolation and culture of prepuce skin rsquo s dermis and hypodermis and to identify oct 4 and ki 67 positive cells from the culture derived cells.The dermis and hypodermis of prepuce were isolated and cultured in 12 well plate for 7 days and transferred into 24 well plate. The culture was observed for fibroblastic like cells. The cells were harvested using trypsinization and centrifugation. The pellets were fixated on methanol to be mounted on histological slides. Immunocytochemistry using oct 4 and ki 67 antibody were performed on the samples. The samples were observed under light microscope.Fibroblastic like cells were found in one of the culture on the 7th day. Dermis culture has more pellet of harvested cells compared to hypodermis culture. Histological slides examination revealed few number of cells and debris can be found. Oct 4 positive cells were found in dermis sample and there were no ki 67 positive cells. "

"ABSTRAKSampah medis berupa prepusium sangatlah mudah di peroleh di Indonesia. Sel-selyang di dapat dari enam sampel di duga memiliki kapasitas pluripotensi dan dapatberdiferensiasi ke lini lain untuk pengobatan secara medis. Pada experiment ini, selkeratinosit di peroleh dari epidermis prepusium, sel tersebut di ambil mengunakanlarutan enzymatik dispase dan tripsin masing-masing di inkubasi semalaman dengansampel. Kemudian sel-sel tersebut di kultur dengan DMEM tinggi glukosa untukmeningkatkan jumlah sel. Setelah di kultur, sel-sel tersebut di ambil untukpengecekan immunositokimia (ISK) Oct-4, hal ini di karenakan Oct-4 adalahpenanda kapasitas pluripotensi. Sample lainnya tetap di kultur untuk eksperimenkonfluensi/differensiasi spontan selama 14 hari. Riset ini telah sukses menggunakanmedium kultur alternatif dan berbiaya efektif untuk menkultur keratinosit. Bahanmedium tersebut yakni; DMEM tinggi glukosa, PRP 10%, heparin 1%, FBS 10%,penstrep 1%, dan fungizone 1%. Hasil dari pada ISK tersebut adalah positif parsialdengan nukleus keratinosit yang terwarnai coklat tua pada lima lapang pandangberkekuatan tinggi dari setiap sampel. Namun, analisis diferensiais spontanmenggunakan alcian blue menunjukkan hasil negative dengan tidak adanyaperubahan dari lini keratinosit ke kondrosit

---

ABSTRACTThe medical waste of preputial skin is easily obtained in Indonesia. The cells isolatedfrom six samples are expected to have pluripotency and able to differentiate to otherlineage for medical treatment. This research uses the epidermal layer of preputial skinto obtain keratinocytes, this cells are taken using dispase and trypsin solution overnightrespectively. Then, the keratinocytes are subsequently cultured using DMEM completehigh glucose to increase the number of cells. The cultured cells are then taken forimmunocytochemistry (ICC) of Oct-4, since it is the marker of pluripotency. The otherhalf of cultured samples are continued for over confluency analysis for fourteen daysto observe spontaneous differentiation. This research has successfully used analternative and cost effective culture medium for keratinocytes. It consist of DMEMhigh glucose, PRP 10%, heparin 1%, FBS 10%, penstrep 1%, and fungizone 1%. Theresult of ICC is partially positive with keratinocytes nuclear being stained dark brownin five hpf from each sample. However, spontaneous differentiation analysis usingalcian blue shows negative result of chondrogenic formation from keratinocytes"