Hasil Pencarian  ::  Simpan CSV :: Kembali

"Pemilihan oosit merupakan salah satu tahap penting dalam fertilisasi in vitro (FIV) sebab semakin banyak jumlah oosit yang masuk kualifikasi, maka semakin besar kesempatan oosit tersebut untuk difertilisasi. Growth Differentiation Factor 9 (GDF9) dan Bone Morphogenetic 15 (BMP15) yang merupakan anggota dari superfamili protein Transforming Growth Factor β (TGF-β), memiliki peranan penting terhadap folikulogenesis. Gen gdf9 dan bmp15 diketahui tidak hanya terekspresikan pada oosit, namun juga pada sel granulosa dan cairan folikel. Oleh karena itu, dilakukan penelitian mengenai ekspresi gen gdf9 dan bmp15 pada sel granulosa dan cairan folikel untuk mengetahui pengaruhnya terhadap kualitas oosit. Lima belas sampel sel granulosa dan cairan folikel dikumpulkan untuk mengukur ekspresi gen gdf9 dan bmp15 secara kuantitatif. Metode kuantifikasi absolut digunakan untuk mengukur tingkat ekspresi gen. Uji korelasi Pearson digunakan untuk menganalisis korelasi antara ekspresi gen gdf9 dan bmp15 terhadap parameter umum fisiologis. Ekspresi gen gdf9 pada sel granulosa memiliki korelasi lemah searah tak signifikan (P>0,05) terhadap umur, tingkat kematangan oosit, tingkat fertilisasi normal, dan tingkat pembelahan. Ekspresi gen bmp15 memiliki korelasi lemah searah tak signifikan (P>0,05) terhadap umur serta memiliki korelasi lemah tak searah tak signifikan (P>0,05) terhadap tingkat kematangan oosit, tingkat fertilisasi normal, dan tingkat pembelahan. Ekspresi gen gdf9 dan bmp15 pada cairan folikel tidak dapat dianalisis sebab kurva standar tidak terkonstruksi.

---

Oocyte selection is one of important steps in in vitro fertilization (IVF) procedures, because more number of qualified oocyte will bring its chance to be fertilized bigger. Growth Differentiation Factor 9 (GDF9) dan Bone Morphogenetic 15 (BMP15) are members of protein superfamily Transforming Growth Factor β (TGF-β) which have important role in folliculogenesis. Gdf9 dan bmp15 genes are not only expressed in oocyte, but in granulosa cell and follicular fluid too. Research has been conducted about gdf9 and bmp15 gene expression in granulosa cell and follicular fluid to know their association with oocyte quality. Fifteen samples of granulosa cell and follicular fluid were collected to measure gdf9 and bmp15 gene expression quantitatively. Absolute quantification method were used to measure gene expression levels. Pearson correlation was used to analize correlation between both gene expression levels and general physiological parameters. The expression levels of gdf9 in granulosa cell had weak positive unsignificant (P>0,005) correlation with age, oocyte maturity rate, normal fertilization rate, and cleavage rate. The expression levels of bmp15 in granulosa cell had weak positive unsignificant (P>0,005) correlation with age, but had weak negative unsignificant (P>0,005) correlation with oocyte maturity rate, normal fertilization rate, and cleavage rate. Gdf9 and bmp15 gene expression in follicular fluid cannot be analized because the standard curve could not be constructed."

"Growth differentiation factor 9 (GDF9) dan bone morphogenetic protein 15 (BMP15) merupakan growth factor yang disekresikan oosit yang berperan penting dalam meningkatkan pertumbuhan awal folikel serta pematangan oosit. Keberadaan protein GDF9 dan BMP15 tidak hanya terdapat pada oosit, tetapi juga pada sel granulosa. Penelitian bertujuan untuk mengetahui ekspresi gen GDF9 dan BMP15 pada sel granulosa manusia. Sel granulosa yang diteliti berasal dari 30 pasien yang menjalani fertilisasi in vitro (FIV). Hasil isolasi RNA dari sel granulosa diubah menjadi cDNA melalui reaksi reverse transcription, lalu ekspresi gen GDF9 dan BMP15 diukur dengan QRT-PCR. Hasil penelitian menunjukkan bahwa sebagian besar sampel tidak mengekspresikan gen GDF9 dan BMP15. Beberapa sampel yang menunjukkan ekspresi gen GDF9 dan BMP15 pada sel granulosa memiliki tingkat ekspresi yang bervariasi pada tiap sampel. Hasil penelitian menunjukkan bahwa gen GDF9 lebih banyak diekspresikan pada sel granulosa manusia dibandingkan gen BMP15.

---

Growth differentiation factor 9 (GDF9) and bone morphogenetic protein 15 (BMP15) are oocyte-derived growth factors that have important role to improve early follicle growth and oocyte maturity. Localization of GDF9 and BMP15 protein are not only in oocyte, but also in granulosa cells. Purpose of the research is to find out expression level of GDF9 and BMP15 genes in human granulosa cells. Granulosa cells were collected from 30 patients undergoing in vitro fertilization (IVF) treatment. Total RNA was isolated from the cells and reverse transcribed to cDNA via reverse transcription reaction, and then GDF9 and BMP15 genes expression were quantified using QRT-PCR. Result of this research is granulosa samples majority did not expressed GDF9 and BMP15 genes. Only several samples shown GDF9 and BMP15 genes expression which have vary expression level in each sample. Based on the result, GDF9 gene more expressed in human granulosa cells than BMP15 gene."

"Pendahuluan: Defek tulang kritis merupakan masalah yang menantang bagi ahli bedah ortopedi. Hingga saat ini, belum terdapat konsensus mengenai perlakuan tatalaksana terbaik untuk defek tulang kritis. Di antara berbagai solusi yang diusulkan, recombinant human bone morphogenetic protein-2 (rhBMP-2) adalah osteoinduktor yang paling poten, dan telah menunjukkan hasil yang menjanjikan. Penelitian sebelumnya seringkali menggunakan rhBMP-2 yang didapatkan dari sel ovarium hamster Cina. Namun, rhBMP- 2 yang didapatkan dari sel ovarium hamster Cina ini memiliki berbagai kekurangan seperti biaya tinggi dan hasil produksi yang rendah. Baru-baru ini, rhBMP-2 yang berasal dari Escherichia coli semakin banyak digunakan karena hasil panen yang tinggi dan biaya yang rendah; namun, protein tersebut diekspresikan sebagai badan inklusi, yang memerlukan pemrosesan ekstensif untuk menghasilkan protein bioaktif. Untuk mengatasi kendala-kendala ini, diperlukan metode produksi rhBMP-2 yang efisien. Sampai saat ini, belum terdapat penelitian yang mengevaluasi penggunaan vektor adenovirus untuk transfer gen rhBMP-2 ke sel punca mesenkimal asal jaringan adiposa (SPM-AD) pada model defek tulang kritis pada tikus Sprague-Dawley. Penelitian ini adalah studi eksperimental yang mengevaluasi efektivitas rhBMP-2 yang berasal dari SPM-AD yang direkayasa secara genetik pada model defek tulang kritis pada tikus Sprague-Dawley.Metode: Penelitian ini menggunakan tikus Sprague Dawley sebanyak 36 ekor. Dibuat cacat tulang berdiameter 5 mm terjadi pada diafisis femur pada setiap tikus. Hewan- hewan tersebut dibagi menjadi empat kelompok yang masing-masing kelompok terdiri dari 9 ekor tikus. Kelompok pertama mendapatkan rhBMP-2 yang berasal dari SPM-AD yang dimodifikasi secara genetik dengan granul hidroksiapatit (HA) (kelompok rhBMP- 2), kelompok kedua mendapatkan sekretom SPM-AD dan granul HA (kelompok sekretom AD-MSC), kelompok ketiga mendapatkan granul HA (kelompok HA), dan yang keempat adalah kelompok kontrol. Adenovirus digunakan sebagai vektor transfer gen untuk mentransduksi rhBMP-2 ke SPM-AD. Larutan akhir yang digunakan dalam penelitian ini terdiri dari campuran lisat dan sekretom SPM-AD dengan perbandingan 2:1, dan konsentrasi akhir rhBMP-2 adalah 132,33 pg/mL. Tikus dikorbankan 8 minggu setelah operasi. Tulang femur dipanen dan diperiksa nilai protein Indian hedgehog (Ihh), parameter histomorfometri, dan load to failure.Hasil dan Pembahasan: Selama periode pengamatan, masing-masing terdapat satu, dua, dan dua ekor tikus mati pada kelompok rhBMP-2, HA, dan kontrol. Kelompok rhBMP-2 memiliki protein Ihh lebih tinggi dibandingkan kelompok HA dan kontrol. Kelompok rhBMP-2 juga memiliki total area kalus dan nilai load to failure yang lebih tinggi dibandingkan ketiga kelompok lainnya. Proses penyembuhan yang unggul dari kelompok rhBMP-2 kemungkinan dihasilkan dari sifat rhBMP-2 itu sendiri yang mendorong diferensiasi sel punca mensenkimal menjadi osteoblas, sehingga menghasilkan regenerasi tulang.Kesimpulan: Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa penggunaan rhBMP-2 yang berasal dari SPM-AD yang dimodifikasi secara genetik berhasil menatalaksana defek tulang kritis pada tikus Sprague-Dawley.

---

Introduction: Critical-sized bone defects (CSBDs) remain challenging problem for orthopaedic surgeons. To date, there are no consensus regarding the best treatment for such entity.

Among various solutions proposed, recombinant human bone morphogenetic

protein-2 (rhBMP-2) is the most potent osteoinductor, and it has shown promising results. Early orthopaedic studies used mammalian cell-derived rhBMP-2, especially Chinese hamster ovary (CHO) cells. However, CHO cell-derived rhBMP-2 presents disadvantages such as high cost and low production yield. Recently, Escherichia coli- derived rhBMP-2 has been increasingly used owing to the high yield and low cost; however, the protein is expressed as inclusion bodies, which need extensive processing involving isolation from cell, solubilization, refolding and purification to produce the bioactive proteins. To overcome these obstacles, an efficient method for producing rhBMP-2 is required. To date, there is no study that has evaluated the use of adenovirus vector for gene transfer of rhBMP-2 to adipose-derived mesenchymal stem cells (AD-

MSCs)

in CSBDs model in Sprague-Dawley rats. This is an experimental study that evaluated the efficacy of rhBMP-2 derived from genetically-modified AD-MSCs in CSBDs model in Sprague-Dawley rats.

Methods: A total of 36 Sprague Dawley rats were examined in this study. A bone defect of 5 mm in diameter was created in femoral diaphysis in each of the rat. The animals were divided into four groups of 9 rats each. The first group received rhBMP-2 derived from genetically-modified AD-MSCs with hydroxyapatite (HA) granules (rhBMP-2 group), the second received AD-MSCs secretome and HA granules (AD-MSCs secretome group), the third received HA granules (HA group), and the fourth was control group. Adenoviruses were used as gene transfer vectors to transduce rhBMP-2 to AD-MSCs. The final solution consisted of AD-MSCs lysate and their secretome with ratio of 2:1, and the concentration of rhBMP-2 was 132.33 pg/mL. The rats were sacrificed 8 weeks after the surgery. The femurs were harvested and submitted for Indian hedgehog (Ihh) protein, histomorphometric parameters, and load to failure analyses.

Results and Discussion: During the observation period, one, two, and two rats died in the rhBMP-2, HA, and control groups, respectively. The rhBMP-2 group had higher Ihh protein compared to HA and control groups. The rhBMP-2 group also had higher callus total area, and load to failure value compared to the other three groups. The superior healing process from the rhBMP-2 group might be due to the property of rhBMP-2 itself which promotes differentiation of mesenchymal stem cells into osteoblasts, resulting in bone regeneration.

Conclusion: The results of this study indicate that the use of rhBMP-2 derived from genetically-modified AD-MSCs could successfully treat CSBDs in Sprague-Dawley rats."

"Defek tulang yang kritis menimbulkan beban kesehatan yang besar secara global. Studi ini berfokus pada implantasi ADMSCs-EVs (eksosom) terhadap tikus model defek tulang kritis. Penelitian dilakukan untuk menginvestigasi kandungan miRNA pada ADMSCs-EVs (eksosom) yang memengaruhi histologi tulang defek kritis, ekspresi BMP2, dan jalur pensinyalan Wnt. Pada penelitian, dilakukan ekstraksi total RNA dan analisis Microarray terhadap miRNA. Eksperimen secara in vivo dilakukan terhadap 16 tikus SD model defek tulang kritis (8 untuk ADMSCs-EVs/eksosom, 8 untuk NaCl) serta 4 tikus SD sehat sebagai kontrol. Tikus dari masing-masing kelompok diterminasi pada hari ke-14 atau 28. Sampel defek tulang dikumpulkan untuk analisis histologi, protein, dan molekuler. Analisis histologi menunjukkan peningkatan pembentukan kalus lunak pada kelompok perlakuan ADMCs-EVs (eksosom) pada hari ke-14 atau 28 dibandingkan dengan kontrol negatif. Penurunan regulasi miR-433-3p, miR-542-3p, dan miR-328-3p pada ADMCSs-EVs (eksosom) diketahui meningkatkan ekspresi Wnt3A. Sementara itu, peningkatan ekspresi miR-93-5p pada ADMSCs-EVs (eksosom) diketahui menghambat persinyalan BMP2 yang dikonfirmasi oleh ELISA BMP2 dan ekspresi chordin (antagonis BMP-2) yang lebih tinggi. Spp1 sebagai gen hilir pensinyalan BMP-2 dan Wnt tidak menunjukkan ekspresi yang berbeda. Mikro RNA spesifik pada ADMSCs-EVs (eksosom) mengatur pensinyalan BMP-2 dan Wnt untuk meningkatkan pembentukan kalus lunak pada defek tulang kritis kelompok yang diberi perlakuan ADMSC’s EVs dibandingkan dengan kontrol negatif.

---

Critical bone defects pose a substantial healthcare burden globally. This study focuses on the implantation of ADMSCs-EVs (exosomes) in critical-sized bone defect rats. This study aimed to investigate the miRNA content ADMSCs-EVs(exosomes) which affected critical-sized bone histology, BMP2, and Wnt signaling pathway. Total RNA extraction and Microarray analysis of miRNA were conducted. In vivo experiments on 16 critical-sized bone defect SD rats model (8 for ADMSCs-EVs/exosomes,8 for NaCl) in addition to four healthy control SD rats. The rats from each group were sacrificed on day 14 or 28. Bone defect samples were collected for histology, protein, and molecular analysis. Histology analysis revealed increasing soft callus formation in the ADMSC’s EVs (exosomes) treated group at days 14 or 28 in comparison to the negative control. Downregulation of miR-433-3p, miR-542-3p, and miR-328-3p in ADMSC’s EVs (exosomes) enhances Wnt3A expression. Upregulation of miR-93-5p in ADMSCs-EVs (exosomes) inhibits BMP2 signaling which is confirmed by BMP2 ELISA and higher chordin (BMP-2 antagonist) expression. Spp1 as a downstream gene of BMP-2 and Wnt signaling are indifferent. Specific miRNA inside ADMSC’s EVs (exosomes) regulates BMP-2 and Wnt signaling to enhance soft callus formation in critical size bone defect in ADMSC’s EVs treated group than in negative control."